AZD3965是一种选择性的MCT1抑制剂，抑制MCT1，Ki为1.6 nM。比作用于MCT2选择性高6倍，浓度高达10μM，也不抑制MCT3和4

体外

AZD3965设计用于选择性抑制单羧酸转运蛋白-1（MCT1），因此预计会影响乳酸进出细胞的运动[1]。AZD3965处理导致缺氧COR-L103细胞内乳酸增加3.7倍，常氧和缺氧NCI-H1048细胞增加3.7倍和3.9倍。在所有其他情况下，观察到<1.9倍的增加。这些数据与AZD3965在细胞中阻断乳酸转运是一致的，其中AZD3965也减少细胞数量并且与通过抑制MCT1起作用的AZD3965一致。当MCT1过表达时，NCI-H1048的EC50在NCI-H1048细胞中从0.14nM增加至10.5nM。这与通过MCT1抑制起作用的AZD3965一致

体内

将携带COR-L103肿瘤的小鼠用100mg/kg AZD3965或载体BID处理21天，并监测肿瘤体积。药代动力学分析表明，100mg/kg AZD3965 BID导致预测的游离AZD3965浓度抑制乳酸转运。AZD3965治疗显着降低COR-L103肿瘤的生长，尽管未见肿瘤消退，与仅针对肿瘤缺氧部分的AZD3965一致

激酶测定

将细胞过夜接种并用100nM AZD3965或载体处理24小时。然后将细胞用PBS洗涤一次，用裂解缓冲液（50mM Mops，100mM KCl，5mM MgCl 2,1mM EDTA，0.1mM DTT，1mM PMSF补充1×mini完全蛋白酶抑制剂混合物片剂）洗涤两次。通过刮擦和离心收获细胞，将沉淀物在液氮中不用缓冲液快速冷冻。将冷冻的等份细胞在冰上解冻并重悬于裂解缓冲液中。细胞在液氮中冷冻3轮并在37℃解冻。每次2分钟，然后将裂解物离心（13000g，10分钟，4℃）直至澄清，然后储存在冰上。使用微量板读数器测定细胞裂解物中的酶活性，以测量细胞裂解物的产生或消耗。NADH/NADPH通过其在340/10 nm处的吸光度，由于直接或偶联的酶反应而发生。用于测定的96孔板在开始反应之前预热至37℃10分钟，由加入5μL细胞裂解液至95μL反应缓冲液（50mM Mops pH 7.4,100mM KCl，5mM游离镁）。补充标准反应缓冲液以测定不同酶的动力学。从相应反应的吸光度中减去对照的吸光度值。Graphpad棱镜6用于绘制V0值与底物浓度的关系，并确定Vmax和Km值。然后将Vmax标准化为细胞裂解物中的蛋白质浓度[1]。MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考

更新时间：2024/1/2 10:10:55