GSK343是一种高效的选择性EZH2抑制剂，IC50为4 nM

体外

GSK343在吡啶酮的4-位含有正丙基，其EZH2Kiapp=1.2±0.2nM。在这项为期6天的增殖试验中，在本研究中评估的细胞系中，前列腺癌细胞系LNCaP对EZH2抑制*敏感，GSK343的生长IC50值为2.9μM。发现GSK343在HeLa细胞中具有13μM的半数抑制浓度值，在SiHa细胞中具有15μM。

体内

与对照相比，GSK343（5mg/kg）处理的小鼠显示出显着抑制的肿瘤生长。GSK343处理组的平均肿瘤体积和重量显着降低。早在植入后20天，相对于对照组，在GSK343处理的群组中观察到肿瘤生长显着减少;这种差异在研究的其余部分持续存在。此外，与对照组相比，异种移植模型中GSK343处理的动物显示E-钙粘蛋白的信使RNA水平显着增加，但波形蛋白信使RNA水平显着降低

激酶测定

使用5个成员PRC2复合物（Flag-EZH2，EED，SUZ12，AEBP2，RbAp48）评估针对EZH2的活性。测定方案可概括如下：从100％DMSO中的固体制备10mM GSK343原液。以384孔格式（1：3稀释，第6和18列为等体积DMSO对照）制备11点连续稀释母板，并使用声学分配技术分配至测定准备板，以产生100nL GSK343和DMSO对照标记。。测定添加物由等体积添加的10nM EZH2组成，并且使用多滴组合分配将底物溶液（5μg/mL HeLa核小体和0.25μM[3H]-SAM）分配到测定板中。将反应板温育1小时，并用等体积添加的含有0.1mM未标记SAM的0.5mg/mL PS-PEI成像珠（RPNQ0098）淬灭。将板密封，暗适应30分钟，并使用Viewlux成像仪获得5分钟终点发光图像。使用ActivityBaseXE分析诸如Z＇和背景信号以及剂量响应曲线的平板统计。使用与EZH2相同的384孔SPA测定法评估EZH1的体外生物化学活性作为5成员PRC2复合物的一部分。对于EZH1和EZH2，缓冲液组分，试剂分配，GSK343板制备，淬灭条件和数据分析是相同的，*终测定浓度为20nMEZH1,5μg/mL HeLa核小体和0.25μM[3H]-SAM。进一步的数据分析，pIC50枢轴和可视化由TIBCO Spotfire[1]启用。MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考

细胞分析

将GSK343溶解于DMSO中并储存，然后在使用前用适当的培养基（DMSO 0.147％）稀释。

为了解释癌细胞系中不同的倍增率，通过检查它们在384孔板中在6天内以大范围的接种密度进行生长，对所有细胞系凭经验确定*佳细胞接种。然后将细胞以*佳接种密度接种并使其粘附过夜。用20点2倍稀释系列的GSK343或0.147％DMSO（载体对照）一式两份处理细胞，并在37℃，5％CO 2中温育6天。然后用每孔25μLCellTiter-Glo裂解细胞，用TECAN Safire2酶标仪定量化学发光。另外，在添加GSK343时（T0）收获未处理的细胞板以定量细胞的起始数。处理6天后的CTG值表示为T0值的百分比，并相对于GSK343浓度作图。将数据与4参数方程拟合以产生浓度响应曲线，并确定抑制50％生长所需的GSK343浓度（gIC50）。MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考

更新时间：2024/1/2 10:10:55