LY2228820是一种新颖的，有效的p38 MAPK抑制剂，IC50值为7 nM，但是不会改变p38 MAPK的活化

生物活性

体外

LY2228820抑制p38α，以及RAW 264.7细胞中磷酸化MAPKAPK-2（pMK2）的水平，IC50值分别为7 nM和34.3 nM。此外，LY2228820抑制脂多糖（LPS）诱导的小鼠腹腔巨噬细胞中TNFα的形成，IC50为5.2 nM[1]。在多发性骨髓瘤（MM）细胞中，包括INA6，RPMI-8226，U266和RPMI-Dox40，LY2228820（200 nM-800 nM）显着阻断p38MAPK信号传导，正如其对p38MAPK下游靶标HSP27磷酸化的抑制所揭示的。，不影响HSP27的表达水平。LY2228820（200nM-400nM）增强硼替佐米诱导的细胞毒性和细胞凋亡，但单独的LY2228820不抑制MM.1S细胞的生长。LY2228820（200 nM-800 nM）也抑制长期BM基质细胞（LT-BMSCs），BM单核细胞（BMMNCs），外周血（PB）CD138+，CD138-或PB中IL-6和MIP-1α的分泌。CD14+细胞。LY2228820（400 nM-800 nM）也阻断CD14+细胞的破骨细胞生成[2]。

体内

在LPS诱导的小鼠中，LY2228820有效抑制TNFα的形成，阈值*小50％有效剂量（TMED50）小于1mg/kg。在胶原诱导的关节炎（CIA）的大鼠模型中，LY2228820对爪肿胀，骨侵蚀和软骨破坏显示出有效作用，阈值*小50％有效剂量（TMED50）为1.5mg/kg[1]。在植入B16-F10黑素瘤的小鼠中，LY2228820以剂量依赖性方式抑制肿瘤磷酸化-MK2（TED50=1.95mg/kg，TED70=11.17mg/kg）。LY2228820抑制MK2磷酸化：小鼠体内TED50=1.01 mg/kg（化合物暴露约100 nM），人体离体IC50=0.12μM与小鼠或人PBMC

实验方法

激酶测定

使用重组人p38α在标准过滤器结合方案中使用ATP[γ-33P]和EGFR 21-mer肽作为底物测定p38α的抑制。在LY2228820存在下使用LPS刺激测定鼠腹膜巨噬细胞中TNFα的功能性抑制。为了更直接地评估细胞中的p38α活性，用LY2228820处理RAW 264.7细胞，然后用茴香霉素刺激。使用磷酸化的MAPKAPK-2（pMK2）（Thr 334）抗体检测p38α活性的水平，该抗体与p38α特异性磷酸化的残基反应。MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考

Animal Administration

LY2228820 is formulated in 1%carboxymethylcellulose/0.25%Tween 80.

Murine B16-F10 melanoma cells are cultured in Dulbecco＇s Modified Eagle Medium supplemented with l-glutamine,high glucose ａnd 10%FBS(GIBCO 11965-092).C57/bl6 mice are implanted in the rear flank with B16-F10 cells(2×106),and when tumors reach approximately 200 mm3 in size,are dosed orally with LY2228820 in 1%carboxymethylcellulose/0.25%Tween 80.Two hours postdose,tumors are excised,homogenized,and lysed for Western blot analysis.MK2 phosphorylation(p-Thr334),normalized to total glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,is quantified by chemiluminescent detection.The 50%or 70%threshold effective dose(TED50 ａnd TED70,respectively)is calculated to approximate effective dose ranges for testing of LY2228820 in xenograft models,that is,where significant target inhibition is observed.The TED50 or TED70 is defined as the dose where a statistically significant effect is achieved,and there is at least 50%or 70%inhibition,respectively,compared with vehicle control.MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods.They are for reference only.

更新时间：2024/1/2 10:10:55