Preladenant是一种有效的竞争性A2A受体拮抗剂，Ki为1.1 nM，比作用于其他腺苷受体选择性高100倍以上。

Preladenant的生物活性

体外

Preladenant还完全拮抗表达重组人A2A受体的细胞中的cAMP。确定Preladenant在A2A受体处具有1.3nM的KB值;该值与放射性配体结合试验中测定的Ki值非常一致。使用表达A2B受体的细胞的类似功能测定法用于证明对A2B受体的选择性。在该测定中，Preladenant的KB值为1.2μM，表明Preladenant对A2A受体的选择性比对A2B受体高923倍[1]。

体内

Preladenant（1 mg/kg）在每日重复给药后抑制L-多巴诱导的行为致敏，这表明运动障碍的发生风险降低。Preladenant在行为绝望模型中表现出抗抑郁样特征，即小鼠尾部悬吊试验和小鼠和大鼠强迫游泳试验[1]。在1mg/kg（分数：9.0）和3mg/kg（分数：6.5）的剂量下，Preladenant产生剂量依赖性的帕金森病评分降低。亚阈值剂量的Preladenant分别将用3mg/kg L-多巴治疗的动物的*小和平均帕金森病评分降低至5.25和6.88。Wilcoxin测试用于比较针对媒介物的个体治疗。Preladenant（3 mg/kg），左旋多巴（3,6和12 mg/kg），以及Preladenant和L-Dopa（1或3 mg/kg+3 mg/kg）的组合均显着改善帕金森病的分。此外，相对于3 mg/kg L-Dopa组，12 mg/kg L-Dopa和L-Dopa+Preladenant组的*小和平均帕金森病评分均显着改善。

Preladenant的实验方法

激酶测定

使用由具有腺苷受体重组表达的细胞制备的膜进行受体结合：人A2A和HEK 293，大鼠A2A和中国仓鼠卵巢，人和大鼠A1和中国仓鼠卵巢，以及人A3和HEK 293.放射性配体竞争结合使用*终测试药物浓度范围在0.1和3μM之间，在96孔板中以200μL的总测定体积进行测定。将膜在pH 7.4的测定缓冲液（A1和A2A，含有10mM MgCl 2的Dulbecco磷酸盐缓冲盐水;A3,50mM Tris-HCl，120mM NaCl，10mM MgCl 2）中稀释。为了从膜制剂中除去内源性腺苷，将4U/mL腺苷脱氨酶加入膜中，然后将其在室温下孵育15分钟。加入放射性配体至终浓度为0.5（[3H]SCH 58261，A2A），1（[3H]DPCPX，A1）或0.25（[125 I]AB-MECA，A3）nM。通过添加100nM CGS 15923（A2A），100nM NECA（A1）或100nM DPCPX（A3）来定义非特异性结合。将板在室温下孵育并搅拌1.5小时（A2A和A1）或2小时（A3）。将膜过滤到Packard GF-B滤板上，并使用Brandel细胞收集器在冰冷的测定缓冲液中洗涤，以分离结合的和游离的放射性配体。将板干燥，然后向每个孔中加入45μLMicroscint20。通过使用迭代曲线拟合程序拟合位移曲线来确定IC 50值。Ki值使用Cheng-Prusoff方程[1]计算。MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考

Animal Administration

Preladenant在50％聚乙二醇400（大鼠和小鼠）中制备。

将Preladenant溶解在环糊精中，超声处理并口服给药。为研究（猴子）。

小鼠和大鼠

使用雄性CD大鼠和雄性CD1小鼠。将预聚物以50％聚乙二醇400口服给药，剂量体积为3至5mL/kg。在强迫游泳试验（FST）中，将小鼠单独放入用水（25℃）填充至10cm深度的玻璃圆筒中并放置6分钟。当鼠标以直立位置漂浮并且仅做小动作以将其头部保持在水上时，判断鼠标是不动的。在6分钟测试期的*后4分钟期间，由对动物治疗无视的观察者记录不动的持续时间。在行为测试前1小时给动物服用载体，Preladenant或SCH 412348。将每只大鼠单独放置在水柱（25℃）中并使其游泳15分钟，然后取出并在加热的外壳中干燥并返回其笼子。二十四小时后（测试日），将动物再次暴露于该条件，记录5分钟期间的总不动时间。另外，记录大鼠攀爬圆筒侧面所花费的持续时间。在测试当天，在行为测试之前1小时给每只动物服用Preladenant，SCH 412348或载体。

猴子

使用六只雌性食蟹猴（Macaca fascicularis）猴子（体重3.5-4.2kg）。通过皮下（sc）施用MPTP（2-3mg/kg）每周一次使动物成为帕金森病，直至通过帕金森病残疾测量发生稳定的帕金森综合征（至少一个月的未改变的残疾评分为8或更高）。规模。在*后一次施用MPTP后至少2个月，用Prolopa（左旋多巴/苄丝肼，100/25mg）长期治疗猴子，直到形成清晰且可重复的运动障碍。在这些猴子中进行本发明的L-多巴和Preladenant（1mg/kg和3mg/kg，口服）的实验。MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

更新时间：2024/1/2 10:11:10