TH-302是一种缺氧(hypoxia)激活前药，缺氧(N2)和常氧(21%O2)环境下，IC50分别为10μM和1000μM

体外

TH-302诱导γH2AX和细胞凋亡。TH-302显示缺氧选择性和浓度依赖性细胞毒活性，其在p53-熟练和缺乏细胞中均相当。单独使用TH-302治疗会导致G2/M细胞的积聚。在TH-302处理的细胞中，PF47736对Chk1的抑制降低了常氧和缺氧条件下TH-302介导的G2/M阻滞。

体内

TH-302是一种缺氧激活的前药，已知可在实体瘤中常见的缺氧条件下选择性激活。在Hs766t肿瘤中，TH-302处理的小鼠的归一化Ktrans的平均值降低69.2％，对于Mia PaCa-2肿瘤降低46.1％，在SU.86.86肿瘤中降低4.9％。与他们自己的对照组相比，Hs766t和Mia PaCa-2治疗组的两项变化均具有统计学意义（P<0.01）[2]。95％氧气呼吸后，低氧组分（HF）显着降低至2.1％±4.7％（P<0.001），而7％氧气呼吸显着增加HF至29.5％±14.7％（P=0.029）。暴露携带横纹肌肉瘤的大鼠增加氧气条件会消除TH-302的作用，并使T4×SV从20.4±3.5降低到15.3±2.5天（P=0.007），而对照动物的T4×SV增加。与放疗联合使用时，TH-302治疗肿瘤的T4×SV从30.8±5.9（TH-302+放疗）降至25.7±2.9天（TH-302+放疗+95％O2）

细胞分析

将TH-302溶解在DMSO中并储存，然后在使用前用适当的培养基稀释。

在常氧（21％O 2）或缺氧（N 2）下，用0.1μMPF477736或AZD7762和TH-302处理细胞2小时。洗涤后，在常氧条件下，在Chk1抑制剂存在下将细胞再培养22小时。将细胞固定在75％乙醇中，并使用细胞周期试剂和番石榴流式细胞术测定细胞周期分布。在常氧（21％O 2）或缺氧（N 2）下将HT-29细胞暴露于TH-302（8nM，40nM，200nM，1μM和5μM）和0.1μM的AZD7762 2小时。洗涤后，在0.1μM的AZD7762存在下将细胞连续培养46小时。进行基于发光的半胱天冬酶活性测定。MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考

Animal Administration

TH-302在盐水（NaCl）（小鼠和大鼠）中制备。

小鼠

5-6周龄的雌性SCID小鼠在左后腿皮下接种SU.86.86，Hs766t或Mia-PaCa2细胞（5×106）。允许肿瘤平均生长三周至平均大小~150mm 3，如使用电子卡尺和肿瘤体积估计的那样计算为π/6[（短轴，mm）2×（长轴，mm）]。然后将小鼠随机化并置于组群中并用腹膜内注射的盐水（对照）或TH-302（50mg/kg）处理。小鼠在磁共振成像方法部分中成像。共有34只小鼠接受了MR成像研究。SU.86.86组由5只TH-302处理的动物和5只对照动物组成;Mia-PaCa2由6只TH-302处理的动物和5只对照动物组成;Hs766t由7只TH-302处理的动物和6只对照动物组成。在该研究期间未观察到显着的动物体重减轻。当肿瘤达到2000mm 3时，处死动物。

大鼠

将同源横纹肌肉瘤R1肿瘤（1mm 3）皮下植入成年WAG/Rij大鼠的侧腹。在平均肿瘤体积为4.2cm 3（范围，2.0-8.1）时开始实验以确保稳定的HF。连续4天给予治疗，并且用腹膜内注射（i.p.;QD×4）和NaCl或TH-302（25,50或75mg/kg）组成。在开始治疗之前，使用[18 F]HX4进行PET扫描。放射疗法在治疗的第3天以0,4,8或12Gy的单剂量施用，在NaCl或TH-302注射后3小时，在氧气修饰后1小时施用。在PET成像和放射治疗期间，使用/甲苯噻嗪（分别为66.7和6.7mg/kg）的混合物麻醉大鼠。在治疗5天期间（1天PET成像，用TH-302或载体注射4天），动物每天暴露于改变的氧浓度4小时以改变肿瘤的HF。烟酰胺（i.p.500mg/kg）和碳水化合物（95％氧气，5％CO 2;5L/分钟）的组合氧气改性由烟酰胺注射组成，30分钟后暴露于碳水化合物呼吸3.5小时。在烟酰胺/碳水化合物处理的中间，施用NaCl/TH-302。在*初的2小时后用NaCl/TH-302注射给予减少的氧气呼吸（7％，残留的N2;2.5L/分钟）4小时。注射[18F]HX4 PET示踪剂[平均18.8 MBq，范围7.1-25.1 MBq;在氧修饰结束前2小时给予使用静脉注射线（Venoflux 0.4mm G27）用10％肝素冲洗的侧尾静脉。在示踪剂注射后3小时进行PET成像。MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

更新时间：2024/1/2 10:11:10