WP1066是一种新颖的JAK2和STAT3抑制剂，对STAT5和ERK1/2也起作用，但对JAK1和JAK3没有影响

体外

WP1066以剂量依赖性方式显着抑制HEL细胞的生长。抑制HEL细胞增殖的IC 50值为2.3μM。WP1066抑制携带JAK2 V617F突变体同种型的人HEL细胞的生长[1]。用WP1066阻断p-STAT3增强了CTX对肿瘤的细胞毒性作用。WP1066对B16细胞的IC50剂量为2.43μM（0.865μg/mL）[2]。WP1066抑制AML胚细胞集落形成细胞增殖，抑制正常BM祖细胞增殖浓度增加，并抑制AML集落形成细胞增殖[3]。

体内

WP1066（30mg/kg，例如）不会进一步增强环磷酰胺对肺黑素瘤病变的治疗效果，增强环磷酰胺对CNS黑素瘤的治疗效果，或进一步增强CTX在C57BL/6J小鼠中的免疫介导的细胞毒性作用。WP1066对CTX抑制肿瘤微环境中的p-STAT3途径发挥累加效应

细胞分析

将WP1066溶于1％DMSO中，用5％葡萄糖溶液稀释。

简言之，将新鲜的低密度外周血细胞和在其生长的对数期的各种细胞系在含有10％FCS的RPMI 1640中洗涤两次，并在血细胞计数器中计数。通过台盼蓝（0.1％）染色方法评估细胞活力。将相同数量的活细胞（每孔5×104）在总体积为100μL的RPMI 1640中孵育，所述RPMI 1640补充有10％FCS单独或与增加浓度的WP1066;在37℃，湿润的5％CO 2气氛中，在96孔平底板中继续孵育长达72小时。每种条件的实验一式三份进行。孵育后，向每个孔中加入20μLCellTiter96One Solution Reagent。然后将板在37℃，湿润的5％CO 2气氛中再孵育60分钟。孵育后立即使用96孔板读数器在490nm波长下读取吸光度。MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

Animal Administration

WP1066配制在DMSO：聚乙二醇（PEG）300（1：4比例）的载体中。

为了确定脾脏和外周血隔室内免疫群体的抑制，将携带肿瘤的小鼠用CTX，WP1066或CTX与WP1066组合处理14天。从脾脏制备单细胞悬液，用FITC缀合的抗CD4（L3T4）或PE缀合的抗CD8（53-6.7）对小鼠和单细胞的外周血进行表面染色，并用APC-细胞内染色。缀合的FoxP3（克隆FJK-16s）。基于各标记物相对于PBMC总细胞计数的阳性表面染色，计数外周血中CD4+和CD8+T细胞的细胞数。FoxP3+Tregs的百分比在外周血和CD4室内计算。MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

更新时间：2024/1/2 10:11:10